冒頭の写真、すべての内容は編集者次第です：フローサイトメトリーにおける血液ルーチンの応用

フローサイトメトリー？

聞いたことないよ！

聞いたことはあるけど、正確には何なのか分からないですか?

あまり馴染みのない方も多いかと思いますが、まずは写真で見てみましょう。

上の写真の 2 つの赤い領域がこの技術によって得られたものです。さて、本題に入りましょう。

フローサイトメトリーは、液体中に浮遊する小さな粒子を数え、分類するために使用される生物学的技術です。この技術は、個々の細胞が光学検出器または電子検出器を通過する際に、その細胞の複数のパラメータを連続的に分析するために使用できます。フローサイトメトリーは、懸濁液中の単一細胞またはその他の生物学的粒子の蛍光信号を検出し、高速の細胞ごとの定量分析と分類を実現する技術です。特異性が強く、感度が高く、速度が速く、分析や分類が可能であるなどの特徴があります。フローサイトメトリーの検出信号は、散乱光信号と蛍光信号の 2 種類に分けられます。

1.散乱光信号

インタールード: 平行な単色光線が液体サンプルに当たると、光の大部分は溶液を通過し、光のごく一部は光子と物質の分子との衝突によりさまざまな角度で散乱し、光子の移動方向が変わります。この光を散乱光といいます。

散乱光信号は前方散乱光と側方散乱光に分けられます。前者は小角散乱光とも呼ばれ、後者は90°角散乱光とも呼ばれます。

前方散乱 (FSC) は、前方方向に収集された散乱光信号です。一般的に言えば、FSC は細胞のサイズを反映することができます。 FSC が強い場合はセルが大きくなり、逆の場合も同様です。しかし、検出対象が非球形細胞（赤血球、精子など）である場合、流体流動システムにおける細胞の向きが一定でないために、レーザー検出時に同じ種類の細胞でも FSC が大きく異なることが生じやすくなります。これには特別な注意が必要です。

側方散乱 (SSC) は、横方向に集められた散乱光信号です。 SSC は細胞膜、細胞質、核膜の屈折率に敏感であり、その強度は細胞内の微細構造や粒子特性に関係しています。一般的に、細胞内の細胞小器官や粒子の数が多いほど、SSC は強くなります。

FSC/SSC デュアルパラメータアッセイを使用すると、蛍光染料を添加せずにサンプルから複数の細胞サブポピュレーションを識別できます。最も古典的な方法は、FSC/SSC デュアル パラメータを使用して、ヒトの末梢血白血球をリンパ球、単球、顆粒球の 3 つのサブグループに分割することです (下の図を参照)。リンパ球は FSC と SSC が比較的小さく、単球は FSC が比較的大きく、SSC が中程度であり、顆粒球は FSC と SSC が比較的大きいです。 （ご存じないですか？3つのカテゴリーは明確ですよね？実は、多くの場所が排除されているため、多くの新参者は理解していないでしょう。）

2.蛍光信号

蛍光シグナルにも2種類あります。 1 つは、レーザー照射下で細胞自身の蛍光によって放出される蛍光信号であり、これは細胞の自己蛍光と呼ばれます。もう 1 つは、細胞膜、細胞質、核膜上の対応する抗原に特異的に結合する蛍光色素で標識されたモノクローナル抗体など、特定の蛍光色素で細胞を人工的に標識する方法です。これらの蛍光染料はレーザー励起によって信号を生成します。蛍光信号の強さは細胞抗原の発現レベルを反映します。蛍光信号を通じて、細胞のサブポピュレーションと機能を分析できます。

3. 散布図（先ほど遊んだモザイクに少し似ています）

（１）血球散布図：前方散乱光（FSC）、側方散乱光（SSC）、側方蛍光（SFL）、前方散乱光信号幅（FSCW）を用いて、血球分析装置は、四分円平面上の散乱点の位置と密度を通じて細胞情報を表示します。 4 つの信号に基づいてさまざまな散布図が生成され、白血球、有核赤血球、網状赤血球、血小板を分類して計数し、異常細胞や未熟細胞を検出します。

（２）WDF検出チャネル

このチャネルを通じて、末梢血中のリンパ球、単球、好中球、好酸球の 4 種類の白血球サブタイプを区別することができます。さらに、異常細胞のヒントが得られるので、再検査に役立ちます。

（３）WNR検出チャネル

このチャネルの主な機能は好塩基球を区別することです。

ついに白血球の5段階分類の結果が出ましたが、異常が見つかった場合は忘れずに再検査を依頼しましょう！

ではまた次回！